1/1/2015 - 31/12/2018
La apolipoproteína A-I (apoAI) es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL). Sus propiedades anti-aterogénicas se atribuyen principalmente a la captación y transporte del exceso de colesterol de los tejidos periféricos hacia el hígado para su catabolismo y excreción, proceso conocido como "transporte reverso de colesterol" (RCT). ApoAI está mayoritariamente constituida por alfa hélices anfipáticas y presenta una gran flexibilidad conformacional que le permite adaptarse a los diferentes estados que adopta en el RCT (libre, unida a membranas, o a diferentes complejos HDL). Evidencia previa indica que dos hélices del centro de su secuencia juegan un rol clave en la unión reversible a membranas y en la inducción de distintas respuestas celulares. Datos recientes nos permiten postular que un ramillete de dos pares de estas hélices, en apoAI dimérica o complejos HDL discoidales (dHDL), se insertan con su eje perpendicular al plano de la membrana. También se propone que las dHDL generadas por células o reacción espontánea con vesículas fosfolipídicas en la transición de fase tendrían una configuración única que permite la formación del ramillete intermolecular, contrariamente a las dHDL reconstituídas con colato (de uso generalizado como modelo); y que las respuestas celulares alteradas observadas con una mutante natural con una deleción en esta región (deltaK107) -como la sebreexpresión de ACAT- se deberían a la conformación incorrecta de este dominio. Este proyecto, en el que usaremos metodologías de biología celular, molecular y estructural; tiene como objetivo general aportar información relevante sobre las conformaciones alternativas que esa región puede adoptar, y correlacionarla con su función en las primeras etapas del RCT. Específicamente, los modelos estructurales propuestos se evaluarán mediante: a) Técnicas computacionales como modelado y dinámica molecular, y b) Técnicas de espectroscopía de fluorescencia con las que se estimarán diferentes distancias específicas en mutantes con residuos de cisteína marcados con grupos fluorescentes. Por otro lado, diferentes métodos de biología celular y molecular se usarán para estudiar los mecanismos y las vías de señalización involucradas en la movilización de los depósitos intracelulares de colesterol por acción de apoAI, en particular en lo referido a la modulación de ACAT, y cómo estos mecanismos están alterados en el caso de la variante deltaK107.