1/1/2017 - 31/12/2021
El presente proyecto se focaliza en el estudio de la glicerol-3-fosfato aciltransferasa-2 (GPAT2). El gen que codifica para esta proteína se expresa en espermatocitos primarios en condiciones fisiológicas, pero también se sobreexpresa en distintos tipos de células cancerosas, en donde contribuye al fenotipo tumoral. Este patrón de expresión es característico de una clase de genes denomimados cáncer-testículo, de interés médico ya que sus productos pueden constituir blancos terapeúticos para el tratamiento de ciertos tipos de cáncer. GPAT2 fue clonada y clasificada como glicerol-3-fosfato aciltransferasa utilizando el principio de homología de secuencia. Nuestros resultados previos indican que posee actividad aciltransferasa, sin embargo el glicerol-3-fosfato no sería su aceptor fisiológico, por lo que resulta imperioso reclasificar este producto génico en base a su actividad enzimática. Los objetivos específicos son: 1) Reclasificar a GPAT2 en relación a su actividad enzimática., 2) Evaluar el rol de Gpat2 en la espermatogénesis en ratón y 3) Determinar los mecanismos moleculares por los cuales GPAT2 contribuye a la proliferación y supervivencia de células tumorales humanas. Hipotetizamos que GPAT2 no es una verdadera GPAT, sino que participa en el remodelado de fosfolípidos, mediante actividad fosfolipasa o transacilasa, y es esa actividad la que promueve a la normal espermatogénesis y tumorigénesis, Para determinar la actividad enzimática del producto génico de GPAT2, utilizaremos modelos celulares de subexpresión y sobreexpresión de GPAT2 y se ensayarán distintas actividades enzimáticas utilizando sustratos radiactivos. Para evaluar el rol de Gpat2 en la espermatogénesis en ratón utilizaremos un sistema lentiviral para silenciar Gpat2 en testículos in vivo y determinaremos la fertilidad, evolución de la espermatogénesis y expresión de genes relacionados al arresto de la meiosis. Con el objetivo de estudiar los mecanismos involucrados en la tumorigenicidad producto de la expresión de GPAT2 humana, utilizaremos líneas celulares desarrolladas en nuestro laboratorio que subexpresan y sobreexpresan GPAT2 y realizaremos ensayos de composición de fosfolípidos y topografía de membrana, análisisis de la funcionalidad del factor de crecimiento epidérmico, y estudios de expresión de genes por microarreglos.Los resultados de este proyecto tendrán importancia en dos temas prioritarios en salud humana: fertilidad masculina y cáncer.