1/1/2016 - 31/12/2019
El proyecto propone generar una plataforma biotecnológica para la producción de proteínas complejas en plantas. Estas proteínas requieren modificaciones típicas de la vía secretoria que sólo se encuentra muy desarrollada en células especializadas. Para superar los cuellos de botella que reducen la eficiencia de la producción de estas proteínas se estudian tres estrategias. La primera consiste en la expresión de polímeros similares a elastina (ELP) que inducen la formación de cuerpos proteicos cuya presencia en la vía secretoria incrementa los niveles de acumulación de proteínas de interés (PI) no fusionadas a ELP. La segunda consiste en la expresión de factores de transcripción que intervienen en la respuesta proteínas mal plegadas y de calreticulina. La tercera estrategia consiste en expresar a LEC2, regular transcripcional clave en desarrollo embrionario. El impacto de esta moléculas efectoras sobre la producción de PI será evaluado en un sistema de expresión transitoria empleando plantas de Nicotiana benthamiana y como moléculas reporteras alfa amilasa y proteínas fluorescentes dirigidas a distintos compartimientos de la vía secretoria. La coexpresión de las distintas moléculas efectoras y de las moléculas reporteras permitirá evaluar el funcionamiento de la vía secretoria, analizar alteraciones de la estructura de los distintos compartimientos y optimizar las condiciones en que estas moléculas son más eficientes para incrementar la producción de la PI. La plataforma desarrollada será testeada en 4 casos modelos. El primer modelo es la producción de inmunoglobulinas G como modelo de moléculas con grandes requerimientos para el plegado y glicosilación. El segundo caso modelo es la producción de un anticuerpo simple cadena (scFv) fusionado a ELP de utilidad en precipitaciones selectivas de PI reduciendo los costos del proceso downstream. El tercer caso testigo es la producción de transglutaminasa tisular humana en plantas, proteína necesaria para desarrollar métodos diagnósticos de la enfermedad celíaca. El último caso testigo es la producción de nanopartículas inmunoestimulatorias basadas en ELP que se administrarán por vía mucosal y se evaluará su capacidad de inducir respuesta humoral y celular. Estos casos modelo servirán para probar la robustez de la plataforma desarrollada